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| AP128218-50T | 50T | 50T | ￥3490.00 | 登錄查看 |
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【產品名稱】 甲型流感H1N1亞型病毒核酸檢測試劑盒(熒光PCR法)
【產品編號】AP128218
【包裝規格】 50人份/盒
【預期用途】
本試劑盒用于對人咽拭子樣本中甲型流感H1N1亞型病毒核酸進行定性檢測。檢測結果僅供臨床參考，不能單獨作為確診或排除病例的依據。
流感病毒屬于正黏病毒科的流感病毒屬，依據內部核蛋白與基質蛋白的抗原性差異，可被分為甲、乙、丙三型（即A、B、C 三型）。據病毒顆粒外膜血凝素（HA）和神經氨酸酶（NA）蛋白抗原性的不同，甲型流感病毒可分為16 個H 亞型（H1~H16）和9 個N 亞型（N1~N9）。其中甲型H1N1流行性感冒（流感）是由一種新的流感病毒引起的急性呼吸道傳染病， 臨床主要表現為流感樣癥狀， 包括發熱、流涕、咽痛、咳嗽、頭痛和腹瀉等。
【檢驗原理】
本試劑盒選用甲型流感H1N1亞型病毒保守基因片段設計特異引物及特異探針，該探針能與引物擴增區域中間的一段DNA模板發生特異性結合，在PCR延伸反應過程中，Taq酶的外切酶活性將5’端熒光基團從探針上切割下來，使之游離于反應體系中，從而脫離了3’端熒光淬滅基團的屏蔽，即能接受光刺激而發出可供儀器檢測的熒光，從而實現在全封閉反應體系中對甲型流感H1N1亞型病毒核酸的自動化檢測。
試劑盒中的內標選用一對管家基因特異性引物，結合特異性探針，該探針能與引物擴增區域中間的一段DNA模板發生特異性結合，內標選用CY5通道，從而實現在全封閉反應體系中對檢測過程的監控，可有效監控假陰性的發生。
【主要組成成份】
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組成 |
規格(50測試/盒) |
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H1N1 反應混合液 H1N1陽性對照 陰性對照 |
750μl×1 80μl ×1 80μl ×1 |
注: 不同批號試劑盒中各組份不可以互換
【儲存條件及有效期】
試劑-20℃±5℃條件下，有效期為12 個月。
未使用完的試劑繼續冷凍保存，不影響其穩定性，試劑反復凍融三次后在-20℃±5℃條件下可保存30 天；試劑開瓶后，在室溫條件下放置不超過8 小時；本產品應以冰盒或者冷藏車進行運輸，模擬運輸實驗表明運輸條件不會影響產品的穩定性和有效期，但運輸時間不應超過7 天。
【適用儀器】
適用于具有FAM、HEX/VIC 、CY5通道的實時熒光PCR儀，如ABI系列實時熒光PCR系統。
【樣本要求】
1. 標本：人咽拭子樣本。
2. 采集容器：應當選用國家批準生產的一次性使用的人咽拭子采樣器。
3. 采集：樣本采集具體方法請參考《微生物標本采集手冊》一書。
4. 存放：2-8℃保存，不超過24小時；-20℃以下保存，不超過3個月；-70℃以下長期保存，但應避免反復凍融。
5. 運輸：采用泡沫箱加冰袋密封進行運輸。
【檢驗方法】
1. 甲型流感H1N1亞型病毒RNA檢測試劑盒可兼容常規RNA提取試劑盒或常規RNA提取方法從待測樣本中制備的合格的RNA。制備的RNA可直接作為RNA樣品，加入PCR反應體系中。
2. 試劑配制【試劑準備區】
從試劑盒中取出H1N1反應混合液，在室溫下融化并振蕩混勻后，2000rpm離心10sec，按15μl量分裝到PCR反應管中，轉移至樣本處理區。（注：每次實驗必須帶陰陽性質控）
3. 加樣【樣本處理區】
分別加入10 μl的陰性對照、H1N1陽性對照（無需抽提）、樣品核酸提取產物，終體積為25μl/管，蓋緊反應管，瞬時低速離心，轉移至檢測區。
4. PCR擴增及熒光檢測【PCR檢測區】
將各反應管按一定順序放入PCR儀上，按以下程序進行PCR擴增：
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步驟 |
循環數 |
溫度(℃) |
升溫速率* |
反應時間(min:sec) |
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1 |
1 |
50 |
6℃/S |
10:00 |
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2 |
1 |
95 |
6℃/S |
00:20 |
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3 |
45 |
95 |
6℃/S |
00:02 |
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60 |
6℃/S |
00:20（收集熒光） |
檢測熒光選擇： H1（FAM），N1（HEX/VIC），內標（CY5），數據采集定在60℃。
*：升溫速率6℃/S建議使用撫生系列實時熒光PCR儀，其它儀器根據儀器具體性能選擇。
**：其它儀器比如ABI7500采集熒光設定為31s，對結果無影響。
【檢驗結果的解釋】
質量控制
1. 陰性對照：無典型S型擴增曲線。
2. 陽性對照：目標基因通道呈典型S型擴增曲線且Ct值≤30。
3. 在同時滿足1、2的條件下，實驗有效，否則無效。
結果判讀
在滿足以上質量控制條件，進行如下分析（FAM通道為H1，HEX/VIC通道為N1，CY5通道為內標）：
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目標基因結果 |
內標(CY5) |
結果判讀 |
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甲型流感病毒H1亞型 (FAM) |
Ct≤37 |
不作要求 |
甲型流感病毒H1亞型核酸陽性 |
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37<Ct<45 |
不作要求 |
復檢*** |
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無Ct值或Ct值=45 |
Ct＜45 |
甲型流感病毒H1亞型核酸陰性 |
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無Ct值或Ct值=45 |
無Ct值或Ct值=45 |
無效**** |
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甲型流感病毒N1亞型(HEX/VIC) |
Ct≤37 |
不作要求 |
甲型流感病毒N1亞型核酸陽性 |
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37<Ct<45 |
不作要求 |
復檢*** |
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無Ct值或Ct值=45 |
Ct＜45 |
甲型流感病毒N1亞型核酸陰性 |
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無Ct值或Ct值=45 |
無Ct值或Ct值=45 |
無效**** |
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待測標本檢測結果37<Ct<45，此時樣本應進行重復檢測，如重復檢測結果Ct值小于45，曲線呈S型且有明顯指數增長期，則判斷為陽性，否則判斷為陰性。
該測試為無效測試，需要排查原因并重新檢測。
【檢驗方法的局限性】
檢測結果不能直接作為臨床確診或排除病例的依據，僅供臨床醫生參考使用。同時，檢測結果和樣本的采集、保存及運輸條件有關，其中任何環節失誤都可導致假陰性結果；如在樣本處理過程中發生交叉污染，則可能出現假陽性結果。
【性能指標】
1. 檢測限：本試劑盒檢測限為500copies/ml。
2. 精密度：兩例高、低陽性的樣本連續重復10次檢測，其Ct值的CV≤5%。
3. 特異性：與其感染部位相同或感染癥狀相似且常見的其他病原體以及人基因組無交叉反應。
【注意事項】
1. 本試劑盒為體外檢測試劑，在使用時操作人員必須經過基因擴增或分子生物學方法檢測的專業培訓，具有相關的實驗操作資格，且其所在實驗室應具備合理的生物安全防備設施及防護程序。
2. 為保證實驗結果的準確性和可靠性請使用已校準的移液器，選用合格的一次性使用的PCR反應管、離心管、槍頭等進行樣本處理及配液等操作，所有用具應不含DNA 酶和RNA 酶。
3. 實驗請嚴格分區操作：
第一區：試劑準備區-準備擴增所需試劑；第二區：樣本處理區-待檢測樣本和對照品的處理；第三區：PCR檢測區-PCR擴增檢測，各區物品均為專用，不得交換使用，避免污染，每次實驗完后立即清潔工作臺。
4. 本產品使用前應在室溫充分融化，混勻并瞬時低速離心。
5. 樣本處理應在生物安全柜中進行，以保護操作人員安全和防止對環境的污染。
6. 每次實驗應設置陰性對照和陽性對照，不同批號的試劑請勿混用，在有效期內使用試劑盒。
7. 待測樣本盡可能新鮮，提取過程應嚴防RNA 酶污染及操作不當導致的RNA降解。
8. -70℃保存的RNA樣本，加樣前應在室溫充分融化、混勻并瞬時低速離心后使用。
9. 分裝有反應液的反應管應扣蓋或裝入密實袋內再轉移至樣本處理區。
10. 加樣時應使樣品完全加入反應液中，不應有樣品粘附于管壁上，加樣后應盡快蓋緊管蓋。
11. 反應液分裝時盡量避免產生氣泡，上機前注意檢查各反應管是否蓋緊，避免泄露污染儀器。
12. 擴增完畢取出反應管，密封在專用塑料袋內，丟棄于指定地點。
13. 實驗中用過的槍頭請直接打入盛有10%次氯酸鈉的廢物缸內，并與其他廢棄物品一同丟棄。
14. 工作臺及各種實驗用物品經常用10%次氯酸鈉、75%酒精和紫外燈進行消毒。
15. 實時熒光PCR 儀需經常校正和清潔載樣板板孔。
16. 本試劑盒涉及的待測樣本應視為具有傳染性物質，操作和處理均需符合衛生部《微生物生物醫學實驗室生物安全通用準則》和《醫療廢物管理條例》相關要求。
17. 僅供科研使用，不可用于人體及動物的治療或臨床診斷等用途。
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資料/datasheet
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