血清是血液凝固析出的淡黃色透明液體，是血漿去除纖維蛋白后的混合物，主要成分包括蛋白質、氨基酸、糖類、維生素和多肽（如生長因子、胰島 素、促生長激素）等。血清是細胞培養(yǎng)過程中重要的營養(yǎng)物質，同時也對細胞起到一定的保護作用。
血清中的沉淀是什么？
用于細胞培養(yǎng)的各種血清產品中都存在各種類型的沉淀。除了膽固醇和一些蛋白沉淀之外，血清中也會含有纖維蛋白和磷酸鈣。雖然沉淀可引起初始問 題，但在細胞培養(yǎng)應用方面，沉淀一般不會對血清的性能產生影響。
1. 纖維蛋白
肉眼可見的較大物質，可達 1-2mm。血清是在低溫條件下收集并迅速加工 處理，導致一些纖維蛋白原仍存在于溶液中。雖然過濾去除了絕大部分的纖維 蛋白，但解凍過程中，纖維蛋白原會再次轉化成纖維蛋白析出，形成沉淀。
2. 磷酸鈣
一種常見的沉淀物，表現(xiàn)為云狀。通過倒置顯微鏡觀察，會發(fā)現(xiàn)許多小黑 點。由于布朗運動，這些黑點可自由移動，因此常被誤認為是細菌污染。
3. 其他：
膽固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白質。
血清沉淀是污染嗎？
無論是較大的絮狀纖維蛋白還是小黑點樣的磷酸鈣，都容易被誤認為是細 菌污染，但其實血清沉淀并不是污染。由于在 37℃的溫度下培養(yǎng)，會加劇纖維 蛋白的析出和磷酸鈣顆粒產生，可采用空培方式驗證污染，血清按所需比例加 入無菌培養(yǎng)基中（不加雙抗），放培養(yǎng)箱中過夜，觀察空培外觀，若為澄清， 則血清無污染。 還可以通過將血清接種在細菌培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，觀察是否存在細菌增 殖，并且進行革蘭氏染色，用油鏡觀察直接判斷是否為微生物污染。
血清沉淀會影響細胞生長嗎？
血清出現(xiàn)沉淀是血清的正常特性，各大品牌的血清均有沉淀的出現(xiàn)，過于 澄清的血清并不代表更高的品質，也可能是在加工過程中提前進行“預老 化”，即反復凍融盡可能的去除纖維蛋白原的結果。血清沉淀的多少與血清的使用效果沒有必然關系，血清沉淀并不會影響細 胞的正常生長。
血清沉淀增多的原因：
① 血清熱滅活；
② 37℃ 孵育；
③ 頻繁的解凍與凍存操作；
④ 解凍過程中未混合；
⑤ 經 γ-輻照；
⑥ 2-8℃ 長時間儲存；
⑦ 在自動解凍的冰箱中儲存。
去除沉淀的方法：
如果血清中含有沉淀，不建議直接過濾血清。若去除這些絮狀沉淀物，可將 血清分裝至無菌離心管中，以 400g 離心 5min，去除大顆粒沉淀，上清液加入培 養(yǎng)基內一起過濾。
血清沉淀離心后
如何減少沉淀產生？
1、正確的解凍方法：
① 2-8℃解凍；
② 解凍過程中隔一段時間輕柔搖勻；
③ 在室溫或 37℃水浴鍋中溶解容易造成沉淀增多。
2、正確使用和保存：
① 非必須不用熱滅活，熱滅活會使血清中部分蛋白質變性析出，影響血清 品質；
② 避免 2-8℃長期保存，分裝后-20℃長期保存，按需溶解，避免反復凍 融。
③ 不建議在-80℃長期保存，-80℃會增大血清包裝瓶破裂的風險，另一方 面解凍時巨大的溫度變化會導致產生更多的沉淀。
④ 避免紫外線照射；
綜上所述，在我們培養(yǎng)細胞的過程中，血清出現(xiàn)沉淀是正常情況，無論是較大的絮狀纖維蛋白還是小黑點樣的磷酸鈣，都不是污染，且沉淀不會影響細胞的培養(yǎng)效果，可以放心使用。
